臨床輸血

A-

A+

注意觀察比較不同濃度紅細(xì)胞懸液的顏色和密度！也可根據(jù)經(jīng)驗使用3%或者4%的商品化試劑紅細(xì)胞的顏色和細(xì)胞扣的大小來做標(biāo)準(zhǔn)對照。

問：為什么試管法血清學(xué)試驗需要洗滌患者紅細(xì)胞？

粘附在紅細(xì)胞表面的血清（漿）中的血型物質(zhì)（可溶性抗原）等會中和試劑抗體，造成凝集減弱或呈假陰性，影響紅細(xì)胞ABO血型抗原的檢測；粘附在紅細(xì)胞表面的冷自身抗體等可使血型檢測及直抗試驗出現(xiàn)假陽性；粘附在紅細(xì)胞上的抗體或其他球蛋白會中和抗球蛋白試劑，造成直抗試驗?zāi)瘻p弱或呈假陰性。紅細(xì)胞洗滌過程可除去粘附在紅細(xì)胞上的抗體、蛋白成分以及可溶性抗原，故試管法血清學(xué)試驗需洗滌患者紅細(xì)胞。

問：為什么微柱凝膠法通常不需要洗細(xì)胞？

微柱凝膠免疫分析技術(shù)中微柱內(nèi)的介質(zhì)起到分子篩的作用，在一定離心力的作用下，分子篩的孔徑只允許游離紅細(xì)胞通過，聚集在微柱底部，即為陰性反應(yīng)；凝集的紅細(xì)胞因體積大于分子篩孔徑而被阻滯，不能通過微柱介質(zhì)層，滯留于微柱介質(zhì)的頂部或介質(zhì)的中間，即為陽性反應(yīng)。示意圖如下：

紅細(xì)胞沉降需要的離心力通常小于100 g，而抗體等蛋白質(zhì)復(fù)合物分子沉降分離需要的離心力至少是3000g。微柱凝膠卡離心機離心時，離心力通常小于300g，可使微柱凝膠孔反應(yīng)腔中的紅細(xì)胞下降分離到反應(yīng)柱中，而血清蛋白、球蛋白以及可溶性抗原抗體復(fù)合物等則不會跟隨紅細(xì)胞一起到達(dá)反應(yīng)柱中，由此就達(dá)到了分離紅細(xì)胞和血清中的抗體蛋白質(zhì)復(fù)合物的效果，所以通常就不需要洗滌紅細(xì)胞。

（伯樂離心力為85g；博迅為兩檔離心，離心力分別為66g和183g；奧森多為兩檔離心，離心力分別為55g和199g。）

微柱凝膠法相關(guān)知識背景

1984年，Jean Adam和Yves Lapierre首先發(fā)明了微柱凝膠檢測法，于1986年申請并獲得發(fā)明專利。

1988年，發(fā)明者瑞士達(dá)亞美（DiaMed）公司首先推廣微柱凝膠法（卡式），并在ISBT大會上展出，在此屆大會上引起轟動。自此，血型檢測領(lǐng)域?qū)儆谘湍z卡的時代到來了。

1996年 AABB 出版的《輸血科技術(shù) 手冊》（第 12 版）將微柱凝膠血型檢測列入紅細(xì)胞血型檢測常規(guī)技術(shù)之中。

附1：如何洗滌紅細(xì)胞 （參考AABB）

1、EDTA抗凝全血2ml，3000 rpm/min，離心5分鐘。

2、吸取上層血漿于干凈試管中，標(biāo)記后待用。

3、下層血細(xì)胞層加入生理鹽水或磷酸鹽緩沖液（PBS）5ml，混勻，洗滌（注意操作輕柔，防溶血?。?，3000rpm/min，離心5分鐘。

4、棄去上清液，重復(fù)步驟3，3-5次。

5、最后1次離心所得的上清液應(yīng)澄清，吸取并完全除去上清，即為洗滌后的壓積紅細(xì)胞，備用。

溫馨小提示：在日常工作中，我們可能沒有那么嚴(yán)格的按照AABB的要求離心5分鐘，久保田KA-2200離心機第3檔離心力為1000g，時間是1分鐘，可用于洗滌紅細(xì)胞。

附2：如何配制不同濃度的紅細(xì)胞懸液 

紅細(xì)胞抗原抗體特異性反應(yīng)時，產(chǎn)生的凝集與反應(yīng)物的濃度有關(guān)。一定數(shù)量的抗體中加入不同數(shù)量的紅細(xì)胞抗原，或者一定數(shù)量的紅細(xì)胞抗原加入不同數(shù)量的抗體都可能導(dǎo)致凝集強度的差異?？乖贵w數(shù)量只有在一個合適的比例才會發(fā)生最強反應(yīng)。因此，調(diào)整合適濃度的紅細(xì)胞懸液成為增強紅細(xì)胞抗原抗體反應(yīng)的關(guān)鍵因素。不同濃度紅細(xì)胞懸液與商品化抗-A和抗-B效價對比（見表2-1）。

洗滌后的紅細(xì)胞經(jīng)重離心后制備成壓積紅細(xì)胞，其紅細(xì)胞間隙內(nèi)仍存留少量血漿或生理鹽水，因此一般在制備紅細(xì)胞懸液時可默認(rèn)壓積紅細(xì)胞間隙中存在10%的介質(zhì)溶液，計算后可根據(jù)表2-2的配制比例配制相應(yīng)濃度的紅細(xì)胞懸液。

操作上要求先加生理鹽水，后取紅細(xì)胞！注意觀察比較不同濃度紅細(xì)胞懸液的顏色和密度！也可根據(jù)經(jīng)驗使用3%或者4%的商品化試劑紅細(xì)胞的顏色和細(xì)胞扣的大小來做標(biāo)準(zhǔn)對照。

好啦，親愛的小伙伴們，今日分享就到這里啦。在日常工作中，您經(jīng)常遇到哪些比較疑惑的問題呢，歡迎在評論區(qū)留言告訴我們，我們將與您一起，共同探討學(xué)習(xí)。

附3：參考文獻(xiàn) 

1、《AABB技術(shù)手冊》（第20版），主譯：桂嶸、陳秉宇、黃遠(yuǎn)帥、王勇軍 

2、《輸血人臨床輸血技術(shù)精進(jìn)班（第一期）實驗手冊》 

3、《微柱凝膠免疫技術(shù)在疑難血型鑒定中的應(yīng)用》，主編：李凌波、陳維佳

4、《紅細(xì)胞血清學(xué)技術(shù)》，主編：沈偉、陳偉、劉鳳霞

本文作者：曾群娟，修改審核：高明、楊賀才。本文僅供學(xué)術(shù)交流，如對某一觀點有爭議，可評論區(qū)留言或后臺加小編微信討論。